Palīdziet vietnes attīstībai, daloties ar rakstu ar draugiem!

PCR ir tests, ko izmanto daudzu slimību diagnostikā. PCR metode ļauj parādīt baktēriju tiešu klātbūtni organismā un konkrēti tās DNS. PCR izmanto, inter alia, in Laima slimības diagnostikā. Kas ir PCR tehnika? Kas ir reāllaika PCR?

Saturs:

  1. PCR (tests) - kāda ir PCR tehnika?
  2. PCR (tests) - PCR metodes pielietošana
  3. PCR (tests) - Laima slimība
  4. PCR (tests) - rezultāti. Vai tie var būt kļūdaini pozitīvi?
  5. PCR (tests) - rezultāti. Vai tie var būt viltus negatīvi

PCR(polimerāzes ķēdes reakcija) ir primārā metode, ko izmanto ģenētiskajās un molekulārajās laboratorijās. To 1983. gadā izstrādāja Kara Mullisa, kurai par to 1993. gadā tika piešķirta Nobela prēmija.

PCR (tests) - kāda ir PCR tehnika?

PCR testssastāv no noteikta DNS fragmenta, piemēram, gēnu, kas kodē Borrelia proteīnus, vairākkārtējas amplifikācijas (parasti 30–40 ciklos), izmantojot polimerāzes enzīmu.

Pēc tam, lai vizualizētu pastiprināto DNS fragmentu, tiek izmantotas īpašas molekulārās krāsvielas. PCR, pateicoties specifisku DNS fragmentu pastiprināšanai, ir īpaši jutīga metode.

PCR metodē DNS fragmenti tiek pastiprināti, izmantojot specifiskus primeru pārus konkrētam baktēriju DNS reģionam. Piemēram, PCR mērķa reģioni, ko izmanto Laima slimības diagnostikā, ir gēni, kas kodē proteīnus, piem. 16S rDNS, recA, fla, p66, OspA.

Bioloģiskais materiāls, no kura var veikt testu, ir:

  • asinis
  • ādas sekcija no migrējošās eritēmas
  • cerebrospinālais šķidrums
  • sinoviālais vai skrimšļa šķidrums
  • urīns

PCR (tests) - PCR metodes pielietošana

Papildus Laima boreliozes diagnostikai ar PCR metodi var noteikt specifiskus citu mikroorganismu vai cilvēku DNS fragmentus. Tāpēc PCR metodi izmanto arī:

  • vīrusu infekciju diagnostika un uzraudzība: herpes vīrusi (herpes vīruss, herpes zoster, Epšteina-Barra, citomegalovīruss), HIV, hepatīta vīrusi (HBV un HCV)
  • bakteriālu infekciju, īpaši baktēriju, diagnostika un uzraudzība,kuras nevar identificēt caur kultūrām, piemēram, tuberkuloze
  • neoplastisku slimību diagnostika un uzraudzība: leikēmija, krūts vēzis, kolorektālais vēzis, plaušu vēzis
  • vēža predispozīcijas diagnoze: krūts un olnīcu vēzis (BRCA1 un BRCA2 gēni), kolorektālais vēzis (APC un CHEK2 gēni)
  • ģenētisko slimību diagnostika: hemohromatoze (HFE gēns), talasēmija (HBA1 un HBA2 gēni), celiakija (HLA gēni)
  • paternitātes testi, kas nosaka bērna un tēva DNS saderību
Vērts zināt

Pašlaik PCR metodei ir daudz modifikāciju. Piemēram, Laima slimības diagnostikā galvenokārt tiek izmantotas ligzdotās PCR (ligzdotās PCR) un reāllaika PCR ( ) metodes. Pēdējā ir kvantitatīvā metode un ļauj noteikt precīzu Borrelia DNS kopiju skaitu pārbaudītajā bioloģiskajā materiālā.

PCR (tests) un Laima slimība

Laima slimības diagnozes pamatā ir seroloģiskā pārbaude. Tomēr ir klīniskas situācijas, kuru dēļ šie testi var būt kļūdaini negatīvi:

  • seroloģiskais logs, t.i., sākotnējais infekcijas periods, kurā organisms vēl neražo specifiskas IgM un IgG antivielas pret borēliju
  • cilvēkiem ar novājinātu imunitāti, kuri neražo pietiekami daudz antivielu
  • imūnkompleksu klātbūtne, kas sastāv no Borrelia antigēniem un specifiskām antivielām pret tiem un novērš antivielu noteikšanu ar seroloģiskām metodēm

Ja pacientam ir aizdomas par Laima slimības simptomiem un seroloģiskā testa rezultāti ir negatīvi, var veikt molekulāro testu, pamatojoties uz PCR metodi.

Borrelia spirohetu DNS var noteikt infekcijas agrīnās stadijās, jo tad spirohetu skaits ķermeņa šķidrumos ir vislielākais.

Laima boreliozes diagnostikā galvenokārt tiek izmantotas seroloģiskās metodes, piemēram, ELISA, bet dažās klīniskās situācijās palīdz ģenētiskā pārbaude, izmantojot PCR metodi

Jo ilgāks laiks no inficēšanās, jo mazāka ir baktēriju DNS noteikšanas iespējamība. Tāpēc atsevišķos gadījumos pirms PCR testa veikšanas baktērijas 1-2 nedēļas tiek audzētas uz īpašām barotnēm un pēc tam tiek veikts tests

Šo pieeju izmanto, ja ir aizdomas par Laima slimību un savākto cerebrospinālo šķidrumu. Infekcijas vēlīnā fāzē piemērotāk ir veikt ELISA testu.

PCR metodi nevajadzētu izmantot parastajā Laima slimības diagnostikā standartizācijas trūkuma dēļpar Borrelia burgdorferi šķirņu sastopamību Polijā.

Tomēr diagnozes grūtību gadījumā (īpaši slimības sākuma stadijā) PCR testa rezultāts ir noderīgs diagnostikas procesā.

Pozitīvs testa rezultāts nozīmē, ka pārbaudītajā materiālā konstatēta Borrelia burgdorferi DNS un tās variantu klātbūtne, taču tas nepaskaidro, vai organisms ir aktīvi inficēts. No otras puses, negatīvs rezultāts neizslēdz baktēriju klātbūtni organismā.

Dažas laboratorijas piedāvā pārbaudīt Borrelia DNS klātbūtni ērcē. Taču šādas pārbaudes rezultāts nav pamats Laima slimības diagnozei sakostam cilvēkam.

PCR - rezultāti. Vai tie var būt kļūdaini pozitīvi?

PCR ir īpaši jutīga metode un tajā pašā laikā ļoti jutīga pret piesārņojumu. Tāpēc, veicot PCR testēšanu, ir ļoti svarīgi izvēlēties atbilstošu iekšējo kontroli, lai izslēgtu kļūdaini pozitīvus rezultātus.

Būtiska nozīme ir arī pareizai pārbaužu materiāla vākšanai, kā arī testu veicošā diagnostikas speciālista pieredzei un uzticamībai.

PCR - rezultāti. Vai tie var būt viltus negatīvi

Tāpat kā jebkurā laboratorijas pārbaudē, arī PCR metodē, var parādīties kļūdaini negatīvi rezultāti. Šeit ir ļoti svarīgi savākt asinis, lai iegūtu atbilstošu antikoagulantu, jo daži no tiem, piemēram, heparīns, var kavēt PCR reakciju.

Materiāla vākšana pēc antibiotiku terapijas sākšanas var samazināt PCR reakcijas efektivitāti un palielināt viltus negatīvu rezultātu iespējamību.

Jāatceras arī, ka Borrelia baktērijas asinīs un ķermeņa šķidrumos dzīvo ļoti īsu laiku, jo, pateicoties īpašiem receptoriem, tās ļoti ātri iekļūst "grūti aizsniedzamās" ķermeņa vietās.

Tāpēc, atšķirībā no citu mikroorganismu diagnostikas, Borrelia spirohetu skaits bioloģiskajā materiālā ir neliels, dažkārt pat pie PCR metodes noteikšanas robežas. Tas var izraisīt arī kļūdaini negatīvu rezultātu.

Atsauces

  1. Dunaj J. et al.PCR metodes nozīme Laima boreliozes diagnostikā. Pārlūkot Epidemiol. 2013, 67, 119–123.
  2. Ērču pārnēsāto slimību laboratoriskā diagnostika Darba grupas ieteikumi: Nacionālā Laboratorijas diagnostikas palāta, Nacionālais sabiedrības veselības institūts-Nacionālais higiēnas institūts, Nacionālais konsultants infekcijas slimību jomā, Infektoloģijas un neiroinfekciju departaments , Bjalistokas Medicīnas universitāte, Polijas Virusoloģijas biedrība, Varšava 2014.
  3. Ružić-Sabljić E. un Cerar T. Laima slimības molekulārās diagnostikas progress. Eksperts Rev Mol Diagn. 2022. gadsJanvāris 17 (1): 19-30.
  4. Valones M.A.A. et al. Polimerāzes ķēdes reakcijas principi un pielietojums medicīnas diagnostikas jomās: pārskats. Braz J Microbiol. 2009. gada janvāris-marts; 40 (1): 1-11.
Par autoruKarolina Karabin, MD, PhD, molekulārais biologs, laboratorijas diagnostikas speciālists, Cambridge Diagnostics PolskaPēc profesijas biologs, specializējies mikrobioloģijā un laboratorijas diagnostikas speciālists ar vairāk nekā 10 gadu pieredzi laboratorijas darbos. Molekulārās medicīnas koledžas absolvents un Polijas Cilvēka ģenētikas biedrības biedrs.Pētniecības stipendiju vadītājs Varšavas Medicīnas universitātes Hematoloģijas, onkoloģijas un iekšējo slimību katedras Molekulārās diagnostikas laboratorijā. Varšavas Medicīnas universitātes 1. Medicīnas fakultātē viņa aizstāvēja medicīnas zinātņu doktora titulu medicīnas bioloģijas jomā. Daudzu zinātnisku un populārzinātnisku darbu autors laboratoriskās diagnostikas, molekulārās bioloģijas un uztura jomā. Ikdienā kā speciālists laboratorijas diagnostikas jomā viņš vada Cambridge Diagnostics Polska satura nodaļu un sadarbojas ar uztura speciālistu komandu CD Diētas klīnikā. Praktiskajās zināšanās par slimību diagnostiku un diētterapiju viņš dalās ar speciālistiem konferencēs, apmācībās, žurnālos un interneta vietnēs. Viņu īpaši interesē mūsdienu dzīvesveida ietekme uz molekulārajiem procesiem organismā.

Palīdziet vietnes attīstībai, daloties ar rakstu ar draugiem!

Kategorija:

Pētījumi