ELISA tests atklāj daudzas slimības, tāpēc tas ir plaši izmantots medicīnā un ne tikai. Tomēr ELISA tests ir vislabāk pazīstams ar Laima slimības diagnozi. Kas ir ELISA tests? Kā interpretēt rezultātus? Kāda ir testa cena?

Saturs:

  1. ELISA tests - ko tas atklāj? ELISA izmantošana
  2. ELISA tests - kas ir tests?
  3. ELISA tests un Laima slimība – kad veikt?
  4. ELISA tests - cena. Cik maksā ELISA tests?
  5. ELISA tests - rezultāti. Vai tie var būt kļūdaini pozitīvi?
  6. ELISA tests - rezultāti. Vai tie var būt kļūdaini negatīvi?

ELISA tests , t.i., ar enzīmu saistītais imūnsorbcijas tests, ir plaši izmantota laboratorijas metode, kas cita starpā kalpo: antivielu kvantitatīvai noteikšanai asinīs.

Sakarā ar šoELISA testsatrastspielietojumsbakteriālu slimību diagnostikā, piemēram,Laima slimība ar Laimu.

ELISA metodes priekšrocība ir tās vienkāršība, ātra izpilde un augsta jutība. ELISA metodi veic, izmantojot īpašas plastmasas plāksnes ar iedobēm, kas piepildītas ar, piemēram, Borrelia proteīniem (antigēniem) un specifiskām monoklonālām antivielām, kas paredzētas antivielu noteikšanai pacienta paraugā.

ELISA tests - ko tas atklāj? ELISA izmantošana

ELISA metodes augstā jutība un vienkāršība padarīja to izmantojamu daudzu slimību diagnostikā, bet vislabāk tā ir pazīstama kā Laima slimības diagnostikas metode.

Laima boreliozes diagnostikā t.s netiešā ELISA, kas ļauj noteikt specifisku IgM vai IgG pārbaudītajā materiālā. Tādā pašā veidā antivielas var noteikt diagnostikas nolūkos:

  • vīrusu infekcijas: herpes vīrusi (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovīruss), HIV, hepatīta vīrusi (HBV un HCV)
  • vienšūņu infekcijas: toksoplazmoze, giardioze
  • autoimūnas slimības: celiakija (anti-tTG vai anti-DPG antivielas), Hašimoto slimība (anti-TG un anti-TPO antivielas), iekaisīgas zarnu slimības (anti-ASCA un anti-ANCA antivielas)
  • parazitāras slimības un alerģijas,kurā tiek noteiktas specifiskas IgE antivielas. To paaugstināts līmenis var liecināt par alerģijām, piemēram, pret ziedputekšņiem un pārtiku, vai parazītu invāziju (bruņots lentenis, cilvēka apaļais tārps)

Ir arī ELISA metodes modifikācijas (tā sauktā sendviča ELISA), kas ļauj noteikt pārbaudītu proteīnu paraugu, kas nav antivielas. Tad pētījuma mērķis ir atklāt bioloģiskajā materiālā:

  • vīrusu vai baktēriju fragmenti, visbiežāk tie ir konkrētam patogēnam specifiski antigēni
  • seruma hormoni, piemēram, estrogēns, prolaktīns, TSH, fT4, kortizols
  • fermenti, piemēram, kalprotektīns, aizkuņģa dziedzera elastāze, sārmainā fosfatāze
  • audzēja marķieri, piemēram, CA-125
  • zāļu klātbūtne serumā

Šo metodi izmanto arī pārtikas rūpniecībā, kur pārtikā var noteikt nelielu daudzumu alergēnu (piemēram, pienu, zemesriekstus), ĢMO vai toksīnus.

ELISA tests - kas tas par testu?

Piemēram, Laima boreliozes diagnoze, izmantojot ELISA metodi, ietver imūno proteīnu noteikšanu bioloģiskajā materiālā – antivielas, kas rodas reakcijas laikā pret Borrelia antigēniem.

Antivielas tiek pārbaudītas divās klasēs - IgM un IgG. IgM ir pirmās antivielas, kas parādās organismā pēc saskares ar baktērijām un laika gaitā samazinās.

To vietu ieņem noturīgākas IgG antivielas, kas organismā var noturēties vairākus desmitus gadu.

Tādā veidā baktēriju klātbūtne organismā tiek netieši pārbaudīta, nosakot antivielas, kas īpaši vērstas pret Borrelia spirohetām.

Antivielas dažādās infekcijas stadijās var būt vērstas pret dažādiem Borrelia proteīniem. Piemēram, agrīnā stadijā tas ir p41 proteīns.

Vēlākos posmos sāk parādīties arvien vairāk olb altumvielu, piemēram, p21, p30, p39, p43. Tāpēc Laima slimības diagnoze ir ārkārtīgi sarežģīta.

Baktēriju proteīnu atlase ir ārkārtīgi svarīga, lai testam būtu augsta diagnostiskā vērtība. Tāpēc Laima slimības diagnostikā regulāri jāizmanto II paaudzes vai III paaudzes ELISA testi, kuros proteīnu komplekti tiek atlasīti tā, lai iegūtu visuzticamāko rezultātu.

ELISA tests un Laima slimība. Kad veikt?

Laima borelioze ir bakteriāla slimība, ko izraisa baktērija Borrelia burgdorferi un tās daudzās šķirnes.

Slimību diagnostika nav viegla, jo imūnās atbildes reakcija pret borēliju ir sarežģīta un laboratorijas metodes ir nepilnīgas.

Visplašāk izmantotā laboratorijas metode ir ļoti jutīgā ELISA metode, kas nosaka specifiskas antivielas, kas rodas pret baktēriju proteīniem.

Laima boreliozes diagnostikā tiek izmantota netiešā ELISA metode, kurā izšķir šādas stadijas:

  • plāksnes iedobumu inkubācija ar materiālu, kas savākts no pacienta, piemēram, serumu. Ja pārbaudītajā materiālā ir antivielas pret borēlijām, tās saistās ar olb altumvielām reakcijas bedres apakšā
  • tad lieko serumu izskalo ar speciālu mazgāšanas šķidrumu (buferi) un t.s. konjugāts, t.i., antiviela, kas saistīta ar fermentu, kas saistās ar iepriekš saistītām antivielām reakcijas iedobēs
  • Konjugāta substrāts tiek pievienots vēlāk, un nav (pozitīvas) vai nav krāsas reakcijas (negatīva)
  • pēdējais solis ir lasītāja (spektrofotometra) nolasīt antivielu koncentrāciju pret borēlijām pacienta serumā

ELISA metodi Laima slimībai veic ar asinīm, un neiroloģisku simptomu (neiroboreliozes) gadījumā arī ar cerebrospinālo šķidrumu

Sinoviālo šķidrumu nevajadzētu pārbaudīt, jo pastāv liela kļūdaini pozitīvu rezultātu iespējamība.

Slimības diagnozes pamatā ir klīniskie simptomi, kas liecina par to, ko apstiprina laboratorisko izmeklējumu rezultāti.

Laboratorijas testa rezultāta pievienošana bez simptomu klātbūtnes neļauj diagnosticēt Laima slimību, jo ir pierādīts, ka antivielas pret Borrelia spirohetām tiek konstatētas arī veseliem cilvēkiem

Laima boreliozes seroloģiskā diagnoze sākas ar daļēji kvantitatīvu ELISA skrīninga testu. Ja rezultāts ir negatīvs, tas nozīmē, ka Borrelia spirohetes nav konstatētas vai rezultāts ir kļūdaini negatīvs.

Ja rezultāts ir pozitīvs vai vāji pozitīvs (nepārprotams), apstiprinoša Western blot testēšana, kas ir ļoti specifiska.

Tas ir paredzēts, lai apstiprinātu ar ELISA metodi iegūto rezultātu "patiesību". Diagnostikas laikā nevar izlaist nevienu no iepriekš minētajām darbībām un, piemēram, veikt diagnostiku, izmantojot Western blot metodi vai veikt diagnozi, pamatojoties uz pozitīvu rezultātu, tikai izmantojot ELISA metodi.

Polijā Laima slimības diagnoze ļoti bieži beidzas pirmajā skrīninga posmā, kas izraisa nepareizu pozitīvu vai vāji pozitīvu rezultātu interpretāciju.

Vērts zināt

ELISA tests - cena. Cik maksā ELISA tests?

Tests maksā apmēram 60zlotu un tiek izgatavots uzreiz. Tomēr jūs varat gaidīt apmēram trīs mēnešus, lai saņemtu nosūtīšanas rezultātus.

ELISA tests - rezultāti. Vai tie var būt kļūdaini pozitīvi?

Kļūdaini pozitīvus rezultātus rada IgM antivielu krusteniskā reaktivitāte ar citiem proteīniem. Ķermeņa ražotās antivielas var "nepareizi" atpazīt citu mikroorganismu antigēnu kā Borrelia antigēnu.

Visbiežāk "kļūdas" rodas cilvēkiem, kuri ir inficēti ar bālo treponēmu, herpes vīrusiem un cilvēkiem ar sistēmisku sarkano vilkēdi un citām reimatiskām slimībām.

ELISA tests - rezultāti. Vai tie var būt kļūdaini negatīvi?

Kļūdaini negatīvi rezultāti var parādīties infekcijas agrīnā stadijā, tad tests jāatkārto pēc aptuveni 3-4 nedēļām. To sauc seroloģiskais logs, t.i., sākotnējais infekcijas periods, kurā organisms vēl nav "paspējis" ražot specifiskas antivielas.

Līdzīgi cilvēkiem ar novājinātu imunitāti, kuri neražo pietiekami daudz antivielu.

Liela problēma, īpaši ļoti intensīvu infekciju gadījumā, ir t.s. imūnkompleksi, kas sastāv no Borrelia spirochetes antigēniem un specifiskām antivielām pret tiem.

Tas padara antivielas "neredzamas" parasti izmantotajām metodēm, piemēram, ELISA, un, lai gan tās ir pārbaudītajā materiālā, tās nevar noteikt.

Šādos gadījumos laboratorija var izmantot imūnkompleksu sadalīšanu. Šī ārstēšana ir paredzēta antivielu atbrīvošanai. Tomēr šī metode netiek plaši izmantota, jo laboratorijās trūkst standartizācijas.

Vērts zināt

Kāpēc Laima slimību nav viegli diagnosticēt?

Tas ir saistīts ar imūnās atbildes sarežģītību pret borēliju un laboratorijas metožu ierobežojumiem. Šķirņu daudzveidība un jaunu infekciju rašanās, kas izraisa infekcijas, īpaši Eiropas kontinentā, neveicina efektīvu diagnostikas metožu izstrādi.

Nesen Eiropā ir parādījušies vairāk šķirņu, piemēram, Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana un Borrelia spielmanii. Turklāt organismā Borrelia spirohetes var pārvērsties par cistām vai uzturēties imūnsistēmas šūnām nepieejamās ķermeņa vietās.

Būdams imūnsistēmai "neredzams". Turklāt ir pierādīts, ka audos var būt baktēriju fragmenti, kuriem ir izteikti pretiekaisuma īpašības. Tiek uzskatīts, ka viņi ir atbildīgi par Laima slimības hroniskajiem simptomiem, neskatoties uz negatīvajiem pētījuma rezultātiemlaboratorija.

Atsauces

1. Witecka-Knysz E. et al Laima slimība: kāpēc diagnostika ir tik sarežģīta? Laboratorijas diagnostikas speciālists 2007. gada aprīlis.2. Moore A. et al. Pašreizējās vadlīnijas, kopējās klīniskās nepilnības un turpmākie norādījumi Laima slimības laboratoriskai diagnostikai, Amerikas Savienotās Valstis. Emerg Infect Dis. 2016. gada jūlijs, 22 (7) .3. Ērču pārnēsātu slimību laboratoriskā diagnostika.Darba grupas rekomendācijas: Nacionālās laboratorijas diagnostiku kameras Nacionālais sabiedrības veselības institūts-Nacionālais higiēnas institūts, Nacionālais konsultants infekcijas slimību jomā, Infektoloģijas un neiroinfekciju katedra, Medicīnas universitāte Bjalistoka, Polijas virusoloģijas biedrība, Varšava, 2014. Hosseini S. i co: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) No A līdz Z. Springer 2022.

Par autoruKarolina Karabin, MD, PhD, molekulārais biologs, laboratorijas diagnostikas speciālists, Cambridge Diagnostics PolskaPēc profesijas biologs, specializējies mikrobioloģijā un laboratorijas diagnostikas speciālists ar vairāk nekā 10 gadu pieredzi laboratorijas darbos. Molekulārās medicīnas koledžas absolvents un Polijas Cilvēka ģenētikas biedrības biedrs.Pētniecības stipendiju vadītājs Varšavas Medicīnas universitātes Hematoloģijas, onkoloģijas un iekšējo slimību katedras Molekulārās diagnostikas laboratorijā. Varšavas Medicīnas universitātes 1. Medicīnas fakultātē viņa aizstāvēja medicīnas zinātņu doktora titulu medicīnas bioloģijas jomā. Daudzu zinātnisku un populārzinātnisku darbu autors laboratoriskās diagnostikas, molekulārās bioloģijas un uztura jomā. Ikdienā kā speciālists laboratorijas diagnostikas jomā viņš vada Cambridge Diagnostics Polska satura nodaļu un sadarbojas ar uztura speciālistu komandu CD Diētas klīnikā. Praktiskajās zināšanās par slimību diagnostiku un diētterapiju viņš dalās ar speciālistiem konferencēs, apmācībās, žurnālos un interneta vietnēs. Viņu īpaši interesē mūsdienu dzīvesveida ietekme uz molekulārajiem procesiem organismā.

Kategorija:

Pētījumi